嘌呤霉素盐酸盐广泛用于抑制蛋白合成
嘌呤霉素(Puromycin)是一种黑链霉菌属产生的氨基核苷抗生素,广泛用于抑制蛋白合成。作用原理是因其具有与tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端类似的结构, 能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合，并掺入到延伸的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应,因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用。嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。用作蛋白质合成的抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
操作说明
一、溶液浓度
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液，经0.22μm滤膜过滤除菌后分装于-20°C冻存;也可溶于甲醇，配制成10 mg/mL的储存液。哺乳动物细胞的推荐使用浓度为1-15 μg/mL，佳浓度需由杀灭曲线来确定。LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。(使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。)
注意：嘌呤霉素为有毒化合物，使用试剂前，请带手套、口罩等防护措施。
附：灭菌曲线确定方法
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期等均有关。为了筛选到稳定表达的细胞株，确定杀死未转染细胞的低嘌呤霉素浓度至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀灭曲线。若细胞对嘌呤霉素耐受性较高，则可能需要大于常规浓度。
1) 第1天:在24孔板中以6-8×104/孔的细胞密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37°C细胞孵育过夜。
2) 第2天:
a)准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如1-15μg/mL，至少5个梯度，参考文献对应细胞相应杀灭大概浓度);
b)往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37°C孵育细胞。
3) 第4天:更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4) 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基。
5) 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物低浓度。
更新时间：2022-05-25 
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