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明胶酶谱法检测试剂盒条带正确的扫描方法

更新时间:2024-07-05 点击量:49

明胶酶谱法检测试剂盒条带正确的扫描方法

 

基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)以无活性的酶原形式分泌,活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白,又称胶原酶。通过影响细胞外基质,胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程,并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程,其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。

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产品名称:明胶酶谱法检测试剂盒(MMP2/9)

产品规格:50T

储存条件:按说明书分别于4℃和-20℃储存

 

检测原理:

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一种广为使用的、基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1nM,高于ELISA方法,其基本原理1和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。

 

MMP透明条带的大小、位置和酶谱的图例。注意因为样品未还原和加热变性,条带位置并不对应推算的蛋白分子量。下图1,正常血浆样品阳性对照可能出现的反相显示的透明条带位置:66kDa(MMP-2),72kDa(proMMP-2),87kDa(MMP-9),92kDa(proMMP-9),注意血浆中只有很少量的激活状态的66kDa的MMP2,增加上样量在ProMMP2下面隐约可见(最右侧泳道)。

 

条带扫描:将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明,但凝胶背景并非真正全黑。解决办法:可用非透射光扫描,或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示,并尽量设置为黑色。MMP 条带则为白色,这种背景黑条带白的格式是英文论文中最常见的格式。