神经肽放免试剂盒操作使用说明

上海信帆生物代理销售神经肽放免试剂盒，现货供应，欢迎。

一．试剂盒的组成

1.            抗体          瓶，（每瓶加缓冲液          ml复溶）。

2．¹²⁵I        标记物        瓶,（每瓶加缓冲液          ml复溶）。

3．           标准品25.6ng，使用时用缓冲液稀释成每100ul分别含2.5、   

  5、10、20、40、80、160、320、640、1280pg的标准品。方法：标准品瓶内加入2ml缓冲液充分混匀,即为每100ul含1280pg的标准品,然后吸取500ul标准液再用500ul缓冲液稀释即为640pg浓度, 依次倍比稀释至每100ul含 2.5pg。加样时5、20pg两点可以不做。注意每一个浓度务必充分混匀。

4．分离剂：50ml/瓶。（用前充分混匀）

5．缓冲液：50ml/瓶。

6．说明书1份。

   收到试剂盒后应2-8℃保存。在2周内进行标本测定，使用中应避免反     

   复冻融。试剂盒NSB应在10%以内，B0值在30~40%之间。

二．操作步骤

1. 平衡饱和加样程序

   多用于组织提取液中神经肽含量的测定。以大鼠垂体、下丘脑β-EP免疫活性物质含量测定为例。

         大鼠垂体、下丘脑β-EP含量的RIA 测定程序（总反应体积300ul）

*标准曲线宜做2-3条，既同一浓度应有2-3个管。

**脑组织及其它们提取液（样品）的加样量，应根据各组织内神经肽的含                           

  量来确定加样量。总加样量不足300ul者用缓冲液补足。

2.  顺序饱和加样程序

    用于神经肽含量较低的样本，如血浆、脑脊液、推挽灌流液中神经肽的含量测定。以人血浆AVP免疫活性物质含量测定为例。

           人血浆AVP含量RIA测定程序（总体积500ul）

   附：无肽血浆的制备（用于血浆的直接测定）：

取4%加膜活性炭2ml离心，弃上清，加等体积血浆，充分振荡10min，再离心(4000rpm,10min)，取上清。上清液重复离心1-2次，即为无肽血浆。血浆中的生物活性物质被活性炭吸附而去除。血浆样本加样量，要在预实验中摸索，每次测定要有正常样品对照。神经肽的RIA，影响因素较多，要特别注意细心操作。

三．标准曲线的绘制和样本含量的计算

    本法分离沉淀计数为结合（B）的cpm数。计算标准管与zui大结合（B0）的比值（B/ B0）×100%，以不同浓度的对数值为横坐标，B/ B0的百分比为纵坐标，在半对数纸上绘制标准曲线，从标准曲线上找出所测样本抗原（神经肽）的含量（上述计算通常可以由计算机处理），再换算成每ml血浆或每mg组织湿重或每mg蛋白某种神经肽的含量。

如果计数器的本底较高，一定要从计算中扣出本底，一般NSB要小于10%。