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       蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书

                                          酶标法100管/96样

测定意义

  蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。

测定原理

SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的仪器和用品

酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、酶标板、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：1mg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存

试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

称取约0.05g组织加入0.5mL提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

蔗糖磷酸合成酶（SPS)测试盒

测定步骤

混匀，25℃准确水浴10min

沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却

混匀，80℃水浴保温10min，冷却后，取200μL至酶标板中，480nm下测定吸光值。

SS活性计算

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性（U/mg prot）=A测定管÷A标准管×1mg/mL÷蛋白浓度(mg/mL) ×100

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性（U/g鲜重）=A测定管吸光度÷A标准管×1mg/mL÷样本鲜重(g/mL) ×100

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