2%TTC染色液检测原理

2%TTC染色液检测原理

2,3,5-氯化三苯基四氮唑，又称四唑红，英文名称： 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，简称TTC，TTZ，或TPTZ。CAS号为298-96-4，分子式：C19H15ClN4，分子量：334.8。 TTC是一种脂溶性光敏感复合物，它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，能与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色。原理是TTC本身可作为一种氧化还原指示剂，活细胞内的脱氢酶（尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶）可以将TTC还原为不溶性的红色稳定的三苯基甲臢(1,3,5-triphenylformazan，TTF），活组织被染成不同程度的红色。当组织缺血、细胞死亡或无生命力时，缺血梗塞组织内的细胞呼吸酶活性下降,则不能发生还原反应,不会产生成色变化、而呈苍白色或染色浅。因此,根据染色部位和染色深浅程度可以鉴定组织或者种子的活力。常用于检测种子的生存能力以及检测实验动物组织的缺血梗塞状况。TTC常用的染色浓度为2%（w/v），也可根据组织类型做浓度的适当调整。

原理：

正常组织中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色稳定的三苯基甲臢(TTF)，而呈红色。如果脑组织细胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅。根据染色部位和染色深浅程度来鉴定组织缺血死亡或者种子的活力。

适用范围：

适用于尸检中的新鲜心、脑组织以及实验动物早期梗死组织的染色,测定脑梗死灶体积。

染色步骤：

1.按照实验设计自行制作组织模型，切片。

2.染色：取新鲜组织或切片完-全浸泡于TTC染液中，放入30-37℃的恒温箱内保温15～30分钟，边孵育边观察颜色变化 

3.染色后用清水或PBS缓冲液轻轻清洗，观察染色结果并拍照记录。

4.若需长久保存，用4%多聚甲-醛溶液或福尔马林固定10～20分钟。

染色结果：

正常组织被染成红色，梗死区不被染色。

注意事项：

1.TTC染色液可重复使用2-3次，可将用过的TTC染色液放到新的容器内继续使用。TTC溶液若变成红色则不可再用。

2.显色时要使组织切片全部浸入TTC染色液中。

3.本品具有微量的光和热敏感性，使用以及存放的过程中避免长时间曝光或者接触到过高温

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。