ABTS二铵盐是过氧化物酶的底物,常用于ELISA实验
ABTS作为底物在过氧化物酶的作用下产生可溶的绿色螯合物,该绿色产物吸收峰为405nm。该反应可用1%SDS终止。相对于OPD或TMB底物,ABTS的显色背景低很多。
ABTS二铵盐也可用于总抗氧化能力检测,ABTS作为显色剂,检测血浆、血清、唾液、尿液、细胞/组织裂解液、植物提取液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
使用方法
第1步:7.4 mmol/L ABTS 0.2ml 和 2.6 mmol/L K2S2O8 0.2ml等比例混合,在室温避光条件下室温放置12小时。
第2步:用pH 7.4磷酸盐缓冲液或无水乙醇、甲醇稀释上述配制的溶液45倍至A734nm=0.7± 0.02。
第3步:取0.2ml 无水乙醇、0.2ml待测样品,分别加入第2步配好的ABTS工作液0.8ml,涡旋轻微震荡混匀10s,室温静止6min。对照无水乙醇A734nm检测结果记为A0 ,样品组记为A ,清除率=(A0-A)/A0*100%
标准曲线:称取12.5 Trolox,定容至20ml,稀释得到25~2500 umol/L浓度作标准曲线。
相关溶液配制:
1,ABTS储存液(7.4mmol/L,0.4ml):取ABTS 3mg,加蒸馏水0.735ml。(分子量:548.68)。
2,K2S2O8储存液(2.6mmol/L,1.43ml):取K2S2O8 1mg,加蒸馏水1.43ml。(分子量:270.32)。
3,Trolox标准液(0.3mmol/L,9.6ml,0.1042mg/ml):取Trolox 1mg,加蒸馏水9.6ml。(分子量:346.0)。