​甘油含量检测试剂盒使用详情

甘油含量检测试剂盒使用详情

描述：甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食 物 中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样，甘 油含 量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法 和经典 GPO-Trinder 酶学反应相结合的方法，通过比色法测定液体样本中的甘油含量。经过优 化后， 操作步骤更加简单，检测线性范围在 10-1200µmol/L，可靠性和重复性俱佳，适合生物 医学、 食品实验室检测。

 原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧 化氢；在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，其光密度值与甘油浓度成正比。 

适用范围：测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。 

所需设备：酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。佳工作波长550nm，如 无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。 

操作步骤： 

一. 样本处理： 酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过线性范围可用蒸馏水或生 理盐水稀释后 再测定。 

培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，如有细胞碎片应4ºC,，12,000g离心5min, 取上清进行测定。 

血液：新鲜抗凝血，4ºC，2,000g 离心 5min 得到血浆；非抗凝血，先 4ºC 静置 2h 得到血清后， 2000g离心10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清70ºC 加热10分钟灭活內源脂肪酶，12,000g 离 心 10min ,取上清测定或-20ºC 保存。 

二 .工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 试剂 R1 与 1 ml 试剂 R2 混合，立即使用或 4ºC 保存 <1天，变色弃去。 

三 .标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品倍比稀 释为 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意设置 0 浓度对照反应管。 

说明： 1、维生素 C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度 EDTA 干扰测试。 2、正常血清甘油浓度为 20-130µmol/L，细胞培养时须用不含酚红的无色无血清培养基，如果 培养基中含有酚红，可以选择含有酚红的无细胞培养基作为对照进行测定