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溶酶体红色荧光探针工作液的配置

更新时间:2021-02-02 点击量:787
溶酶体红色荧光探针工作液的配置


Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。
 
Lyso-Tracker Red可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色,但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。

 
使用说明:
 
1. Lyso-Tracker Red工作液的配制:
 
a. 取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中,使终浓度为50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Red加入到20ml或13.33ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Lyso-Tracker Red工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ 。
 
b. Lyso-Tracker Red工作液使用前需37℃预温育。
 
注:工作液中Lyso-Tracker Red的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低背景,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的Lyso-Tracker Red。
 
2. 溶酶体的荧光标记:
 
a. 去除细胞培养液,加入步骤1配制好的并37℃预温育的Lyso-Tracker Red染色工作液,与细胞37℃共孵育30-120分钟。
 
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b. 去除Lyso-Tracker Red染色工作液,加入新鲜的细胞培养液。
 
c. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳,可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
 
注意事项:
 
Lyso-Tracker Red(1mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体,每次使用前先离心数秒钟,使液体充分沉降到管底。