HRP标记羊抗鼠IgG3使用方法

HRP标记羊抗鼠IgG3使用方法

一、 试剂成分：

HRP* Polyclonal Goat Anti-Mouse IgG3、50%甘油、PBS、稳定剂、保护剂。

二、 使用方法：

ELISA法建议在1：1000-2000选择合适您实验的稀释比例，也可根据您的具体情况在此建议的稀释度范围之外合适的使用。本酶标抗体仅对小鼠IgG3 反应，特异性*。稀释推荐使用含0.2% BSA（或10%牛血清）和0.1% 吐温-20的0.01M的PBS（PH：7.0），也可使用其它正确的稀释用液，原则上配成的工作液要一次使用完，不得多次使用。如确实要多次使用请在配制时加入合适的防腐剂，并要求在2-8℃避光存放，但尽管如此也不要放置太久，以免对您的结果产生不良影响。因不良稀释用液和存放而造成的损失不在投诉范围。本品也可以用于免疫印记和免疫组化实验。

三、注意事项：

1、 虽然本试剂在有效期过后很长一段时间仍可以使用，但还是强烈建议您在管体规定的有效期内正确使用。

2、 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免造成污染和失效。

3、 如果一次使用很少可以将其适当分装后使用，这样可以有效的防止试剂污染。                        

四、 批号和有效期：

请查看管体标签。

五、 保存条件：

-20℃避光保存。

HRP标记抗体的方法
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可bai用戊二醛二步法和过dian酸钠法。尤以简易过dian酸钠法更为常用。 戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
2. 标记步骤
(1) 称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。 (2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。 (3) 将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。 (4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3?小时。 (5) 加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时。 (6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。 (7) 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。 (8) 将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。