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丙酮酸脱氢酶活性检测试剂盒新品上市！
产品内容：
试剂一：110mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：1mL×1 支，-20℃避光保存；
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水
试剂七：粉剂×1 支，4℃保存；
工作液的配制：临用前把试剂四、试剂五、0.5mL 试剂六和试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。
产品说明：
PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)
催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。
PDH 催化丙酮酸脱氢，同时还原 2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致 605nm 光吸收的减少。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和
蒸馏水。
操作步骤：
一、PDH 的提取
准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵
匀浆充分研磨，4 ℃ 11000 g 离心 10min，取上清，置冰上待测。
丙酮酸脱氢酶活性检测试剂盒新品上市！
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 605nm，蒸馏水调零。
2、每个样本需要 180μL 工作液，按样本数取出一定量的工作液置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其
它物种）水浴 10min。
3、空白管：在微量比色皿或 96 孔板中加入 180μL 工作液和 10μL 水，混匀，立即记录 605nm 处初
始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。
4、测定管：在微量比色皿或 96 孔板中加入 180μL 工作液和 10μL 样本，混匀，立即记录 605nm 处
初始吸光值 A3 和 1min 后的吸光值 A4，计算ΔA=A3-A4。
三、PDH 活性计算
a.用微量比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH 活性（U/mg prot）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)÷（ε×d）×V 反总×10
9]÷(Cpr×V 样) ÷T
=904.762×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH 活性（U/g 鲜重）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)÷（ε×d）×V 反总×10
9]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
=913.81×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷W
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单
位。
PDH 活性（U/mg prot）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样) ÷T
=1809.524×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
PDH 活性（U/g 鲜重）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
=1827.62×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷W
注意事项：
1、测定过程中所有样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、测定管的ΔA 值在 0.01-0.25 之间，若测定管的ΔA 值大于 0.25，需将样本进行稀释。
丙酮酸脱氢酶活性检测试剂盒新品上市！
