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五、性价比非常好,节省实验经费。
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。自上世纪70年代初问世 以来,发展十分迅速,目前已被广泛用 于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA技术原理:以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底
物的催化作用相结合起来
1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
6. 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量 与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重复性好。
测定步骤
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。