植物乙烯（ETH）ELISA试剂盒应该怎么用？

植物乙烯（ETH）ELISA试剂盒应该怎么用？

产品简介：

乙烯是由两个碳原子和四个氢原子组成的化合物。两个碳原子之间以双键连接。乙烯存在于植物的某些组织、器官中，是由蛋氨酸在供氧充足的条件下转化而成的。
乙烯是合成纤维、合成橡胶、合成塑料（聚乙烯及聚氯乙烯）、合成乙醇（酒精）的基本化工原料，也用于制造氯乙烯、苯乙烯、环氧乙烷、醋酸、乙醛、乙醇等，尚可用作水果和蔬菜的催熟剂，是一种已证实的植物激素。
乙烯是世界上产量zui大的化学产品之一，乙烯工业是石油化工产业的核心，乙烯产品占石化产品的75%以上，在国民经济中占有重要的地位。世界上已将乙烯产量作为衡量一个国家石油化工发展水平的重要标志之一。
生理作用是：三重反应、促进果实成熟、促进叶片衰老、诱导不定根和根毛发生、打破植物种子和芽的休眠、抑制许多植物开花（但能诱导、促进菠萝及其同属植物开花）、在雌雄异花同株植物中可以在花发育早期改变花的性别分化方向等。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物乙烯（ETH）水平。用纯化的植物乙烯（ETH）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入植物乙烯（ETH），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物乙烯（ETH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物乙烯（ETH）含量。

植物乙烯（ETH）ELISA试剂盒应该怎么用？

操作步骤：

1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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实验时需要注意哪些：

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zuihao控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线，zuihao做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

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