感谢南京客户订购我司大鼠孕酮elisa试剂盒

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客户购买截图如下

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大鼠孕酮 ELISA试剂盒技术原理：

(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

大鼠孕酮 ELISA试剂盒操作步骤:

1、包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):

将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)

2、封闭酶标反应孔:

5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.

洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干

洗涤次数3次

3、加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):

检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.

将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.

4、加入酶标抗体:

酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.

5、加入底物液(现用现配):

TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.

底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.

6、终止反应:

每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.

7、结果判断:

OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)

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大鼠孕酮 ELISA试剂盒经过严格交叉反应和干扰测试及稳定性试验；明确的敏感度；针对所有样品类型达到的性能；广泛的检测范围可以满足大多数检测要求；完善的售后服务和免费的免去您的后顾之忧，