南京信帆生物供应：植物基因组DNA提取试剂盒

更新时间：2014-09-03

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产品名称：		植物基因组DNA提取试剂盒
产品规格：		50T
产品货号：		D1500-50
单位：		盒
供应商：		南京信帆生物

植物基因组DNA提取试剂盒
1. 匀浆和细胞裂解。
使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤，具体说明如下：
【从动物组织中提取基因组DNA】
◆使用研钵进行匀浆时：
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。
注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A．富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。
注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。
◆使用研磨棒进行匀浆时：
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。
植物基因组DNA提取试剂盒
【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】
① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻*后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料种类
植物材料使用量*
植物花、叶片
10～100 mg
植物茎
60～240 mg
植物根
80～240 mg
植物种子
80～240 mg
* 如选取植物的根、种子等样品时，因其基因组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。
如从培养的植物细胞中提取基因组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。
注）样品研磨应充分，否则将会严重影响基因组DNA的收率。
② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。
注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。
【从全血中提取基因组DNA】
① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。
② 加入500 μl的Solution A。
③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。
注）人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。
【从培养细胞中提取基因组DNA】
◆使用悬浮培养的动物细胞时：
① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。
② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。
植物基因组DNA提取试剂盒
◆使用贴壁细胞时：
① 弃尽培养液，向培养皿中加入650 μl的Solution A，室温静置1分钟。
注）96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时，请分数次处理细胞。
② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞，取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。
③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。
2. 加入400 μl的Solution B，振荡混合。
3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。
4. 弃去上层有机相，再加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。
5. 弃去上层有机相，然后将水相溶液（无色下层）转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12,000 rpm离心1分钟。
注）有机相（上层）带有颜色，请务必除尽，否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑，在过滤时将被去除。
6. 弃Filter Cup，在滤液中加入400 μl的DB Buffer，混合均匀。
7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于*冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置，可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。
7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上，将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中，开启调节负压装置，缓慢吸走Spin Column中的溶液（流速控制在1滴/秒）。
8. 将负压调至zui大，向Spin Column中加入500 μl的Rinse A，吸尽Spin Column中溶液。
9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B，吸尽Spin Column中溶液。
注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于*冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column，将其安置于试剂盒中的Collection Tube上，12, 000 rpm离心1分钟。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
植物基因组DNA提取试剂盒
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