乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒使用详情

乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒使用详情


产品简介：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

3. 丙酮酸钠标准液：取 100µL 标准液，倍比稀释至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用 2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。

LDH 活力单位计算：
1. 计算样品丙酮酸的含量，即将∆A 带入回归方程中（x），计算 y 值
2. 血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。LDH（U/mL）=y×V 样÷V 样÷T×103=66.7×y
3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。LDH（U prot）= y×V 样÷（Cpr×V 样）÷T×103=66.7×y÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g 鲜重）= y×V 样÷（W÷V 样总×V 样）÷T×103=66.67×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= y×V 样÷（500÷V 样总×V 样）÷T×103=0.133×y
V 样：反应体系中加入的样本体积，10µL=0.01mL；V 样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；103：1µmol/mL=103nmol/mL。 

 

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