明胶酶谱试剂盒操作时要如何进行优化

明胶酶谱试剂盒操作时要如何进行优化

信帆生物的明胶酶谱试剂盒，主要用于检测MMP2，MMP9的活性，适用样本多样，包括细胞培养液，细胞上清液，全血等样本，操作和WB免疫印迹差不多，产品现货供应！

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。

凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。

实验中的小知识分享给大家：

1.做酶谱要测定样品蛋白的浓度（同Western blot，建议用BCA法）；

2.酶谱法是测定样品中MMP-2、9活性的，如果煮沸使蛋白变性就没有用了，故禁忌煮沸；

3.上样缓冲液中也不能加β-巯基乙醇，这点由western blot转作明胶酶谱的朋友切记、切记；

4.蛋白上样量必须保证一样，不会出现一致的透明条带，如果不能保证上样量一致，测出的相对活性也没有统计分析的意义；

5.上样时需要注意的一点，必须在4℃环境中操作，我用的是冰台，同时所用的蛋白样品（-80℃冰箱）不能是以前曾解冻使用过的，必须是新取出的，因为只要解冻就会有部分酶降解，影响你的结果。此外做过一次酶谱的蛋白样品也不要反复使用，下次应使用其它已分装、未解冻过的样品；

由于明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液 配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。因为检测蛋白活性,所以应尽量避免蛋白变性,我们一般都要求冰上操作,电泳也放在冰水里进行的。

这些您都记住了吗，掌握了这些知识，在操作的时候能够做到这些，对于您的实验一定会事半功倍！

明胶酶谱试剂盒操作时要如何进行优化