硝酸还原酶试剂盒检测起来超方便!
硝酸还原酶是一种氧化还原酶,可催化硝酸离子还原成亚硝酸离子的反应。
硝酸还原酶位于细胞质内或细胞膜外,在硝酸盐还原途径中是限速因子,通过 NADH和 NADPH 其中之一或两者( 双功能) 提供两个电子催化反应,使硝酸盐转换成亚硝酸盐。
测定意义
NR EC 1.7.1.3 广泛存在于植物中, 是植物 硝态 氮 转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对作物的产量和品质有影响。
测定原理
NR催化 硝酸盐还原为亚硝酸盐 NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD +H 2 O 产生的亚硝酸盐 能够 在酸性条件下 与对 氨基苯磺酸及 α 萘胺 定量生成红色偶氮化合物 生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰,可用分光光度法测定。
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样品测定的前处理
组织的前处理:
(1 取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜标本洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可),浸泡 2h ,取出样本,滤纸吸干后20 冷冻 30min ,取出样本,滤纸吸干。 (一般不要诱导处理,预测定结果没有活性则需要 诱导处理)
(2 按照组织质量( g )):提取液体积 ( 为 1 5~10 的比例(建议 称取约 0.1g 组织,加入
1mL 提取液 进行冰浴匀浆。 8 000g 4 离心 10min ,取上清,置冰上待测。
细菌或培养细胞的前处理:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4 个):提取液体积( mL )为 500~1000 1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20 %或 200W ,超声 3s ,间隔 10s ,重复 30 次); 8000g 4 离心10min ,取上清,置冰上待测。
植物体内的硝酸盐在硝酸还原酶和亚硝酸还原酶的作用下,通过代谢途径转化为亚硝酸盐,再转化为铵,后被用于蛋白质的合成。土壤中硝酸盐含量过高时,植物体内的硝酸还原酶和亚硝酸还原酶不发挥作用,从而导致硝酸盐和亚硝酸盐的积累。亚硝酸盐是在叶片褐变和茎形成过程中产生的。亚硝酸盐是亚硝基化剂的前体,亚硝基化剂与烟草生物碱反应生成烟草*亚硝胺(N-亚硝胺)。
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