辣根过氧化物酶实验中为广泛的标记用酶！

辣根过氧化物酶实验中为广泛的标记用酶！

POD是一种具有氧化还原酶性质的血红素蛋白。用于生化研究，是酶标记法所用的一种主要酶。也用于生物液体中 葡萄糖和半乳糖的测定

溶解性10 mg/mL in water 
来源From horseradish 
别名Donor: hydrogen-peroxide oxidoreductase；Horseradish peroxidase；HRP POD 
英文名称Peroxidase(POD) 
CAS9003-99-0 
储存条件-20℃ 
酶活/效价233-300units/mg solid 
外观（性状）褐色结晶性冻干粉状
 
 

HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。

RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1％(W/V)酶溶液吸光度为22.5，浓度为227umol/L]。HRP干燥贮存于–20oC可保持稳定，使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH 7.4)溶液作为基质冷冻保存，可使酶结合物稳定数年。

HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定，用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0％甲醛水溶液固定做冷冻切片，均不能使其活性改变。氰hua物或硫化物在10–5～10–6mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用；氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol／L浓度时抑制HRP；HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。

因此，在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如氟化钠、叠氮钠和强酸等作为酶反应的终止剂。此外，在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时，为防止酶失活，应避免使用叠氮钠作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型：

①含糖量高的酸性同工酶。

②等电点接近于中性(或微碱)的含糖量相对较低的同工酶。

③含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP，以PI为8.7～9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分，其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成，血红素基团则位于其间而成夹心结构，糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少；无游离的。—氨基，仅有2个可测出的组氨酸，6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此，HRP一般仅有1～2个可用于耦联的氨基。

HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉；另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。

辣根过氧化物酶实验中为广泛的标记用酶！