上海信帆告诉大家：做明胶酶谱法实验的几个小贴士

大家在用明胶酶谱法测定MMP2/9活性的时候，总是会遇到一些不同的问题，现在我们就把实验中的一下小贴士告诉大家，供大家参考。

1.做酶谱要测定样品蛋白的浓度（同Western blot，建议用BCA法）；
2.酶谱法是测定样品中MMP-2、9活性的，如果煮沸使蛋白变性就没有用了，故禁忌煮沸；
3.上样缓冲液中也不能加β-巯基乙醇，这点由western blot转作明胶酶谱的朋友切记、切记；
4.蛋白上样量必须保证一样，不会出现一致的透明条带，如果不能保证上样量一致，测出的相对活性也没有统计分析的意义；
5.上样时zui重要的一点，必须在4℃环境中操作，我用的是冰台，同时所用的蛋白样品（-80℃冰箱）不能是以前曾解冻使用过的，必须是新取出的，因为只要解冻就会有部分酶降解，影响你的结果。此外做过一次酶谱的蛋白样品也不要反复使用，下次应使用其它已分装、未解冻过的样品；
6.电泳后的步骤很简单，液体别配错，照着方法做就可以了。

如果你曾做过Western blot，在这里恭喜你了，只要注意几个小细节，明胶酶谱对你非常简单。

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